1ª Patrulla
Zarpa de Kiel el 9 de Noviembre de 1943 hacia el Atlántico Norte.
El U543 fue uno de lo varios uboote que tomaron posiciones al Oeste de las islas Británicas y permanecieron sumergidos.
A primeros de Diciembre se reagruparían al Oeste del Canal del Norte creando al Grupo Coronel para interceptar al convoy ONS24. El servicio de reconocimiento no lograría avistar al convoy y este pasaría al Norte del Grupo Coronel.
A mediados de diciembre el Grupo Coronel aumentaría con la llegada de nuevos uboote y se dividiría en dos Subgrupos, Coronel-1 y Coronel-3 con el objetivo de interceptar al convoy ON214. El U543 quedaría encuadrado en el Grupo Coronel-3. De nuevo la aviación no daría con el convoy y este pasaría al Sur de los uboote .
Los uboote situados más al Sur en la línea de patrulla se dirigirían hacia el Sur para tratar de localizar al convoy ONS25. El U543 operaría independientemente al Este de Newfounland. A primera hora del día 3 de Enero atacaría sin éxito a un Destructor al Este de Cape Race.
El U543 llegaría a su nueva base en Lorient el 24 de Enero de 1944.
2ª Patrulla
Zarpa de Lorient el 28 de Marzo de 1944 hacia el Atlántico Central.
En el trayecto el U543 sería reabastecido por el U488 a unas 700 millas al Oeste de las islas de Cabo Verde. El día 19 esquivaría al portaviones USS.Tripoli y a sus escoltas.
A partir de mediados de Mayo el U543 operaría al Oeste de Freetown y en el golfo de Guinea sin resultado. Ya de regreso a la base el U543 sería localizado el día 2 de Julio al Suroeste de las islas Canarias por un avión Avenger del VC-58 (Ens F.L.Moore) procedente del portaviones USS.Wake Island.
A pesar de la fuerte defensa antiaérea realizada por el sumergible, el avión lograría lanzar dos cargas que hundirían al U543.
No hubo supervivientes, 58 muertos.
La posición del hundimiento del U543 fue 25º34’N 21º36’W.
Al no hallar rastros que confirmaran el hundimiento durante dos semanas se continuaría la búsqueda del U543 con la ayuda de aviones Fortress del Mando Costero de la RAF procedentes de las islas Azores.
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